为明确我国马铃薯 Y 病毒(Potato virus Y, PVY)株系组成及其在不同寄主上的分布特征, 文章对31条PVY中国分离物的基因组编码区进行了系统发育及重组分析。系统发育分析结果显示, 最大似然法(maximum likelihood, ML)和邻接法(neighbor-joining, NJ)重建的系统发育拓扑结构基本一致, GF_YL20、FZ10、DF、SD1、1116和9703-3等6个分离物均未与已知株系相聚, 其他株系来源相同的分离物以较高的自展值相聚成簇, 显示出较强的株系特异性。重组分析显示, 31个PVY分离物中, 共有28个PVY分离物均检测到具有显著的重组信号, 这些分离物主要包括PVYN-Wi、PVYNTN和PVYNTN-NW三种株系。进一步分析显示, 分离物1104、DF、SD1、1116和9703-3为未报道过的PVY新重组分离物。株系统计结果显示PVY重组株系已上升为优势株系, 生产上需要密切注意这些株系, 尤其新重组分离物的发展动态。以上结果表明, 综合应用PVY全基因组序列的系统发育和重组分析, 可以实现PVY株系的准确鉴定。

针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究.采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANNIBAL中,得到了载体pHIV,再用NotI对pHIV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNAi载体pARIV.采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern blot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2～4之间.攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVY°以及PVX和PVY°混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照.这一结果将为利用RNAi干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNAi)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段.