1 湖南农业大学园艺园林学院, 湖南 长沙 410128
2 国家中医药管理局亚健康干预技术实验室, 湖南 长沙 410128
3 湖南农业大学食品科学技术学院, 湖南 长沙 410128
目的: GIP受体激动剂类药物筛选模型的构建。方法: GIP受体激动剂能刺激胰岛素分泌, 可作为治疗Ⅱ型糖尿病的潜在药物, 因此, GIP受体激动剂的筛选模型十分重要。本研究采用PCR的方法扩增GIPR基因, 将扩增产物酶切回收后与表达载体pCMV6-AC-GFP连接, 构建pCMV6-AC-GIPR-GFP重组质粒, 转化大肠杆菌DH5α经菌落扩增、质粒提取及序列测序重组质粒; 利用脂质体lipofectamine2000转染重组质粒到RIN-m5F细胞中, 通过抗生素G418筛选, 挑单克隆得到稳定的RIN-m5F/GIPR-GFP细胞株。结果: 结果表明PCR扩增获得长度为1 319 bp的GIPR基因, 克隆至pCMV6-AC-GFP真核表达载体, 经菌落PCR酶切鉴定及序列分析后, 证实质粒pCMV6-AC-GIPR-GFP构建成功; 通过荧光显微镜观察到细胞内荧光分布均匀, 表明重组质粒成功转到RIN-m5F细胞中。该细胞株经阳性对照(D-Ala2)GIP处理后, 与对照组对比, 具有荧光斑点聚集。结论: 因此, GIP受体激动剂筛选模型RIN-m5F/GIPR-GFP成功构建, 可用于筛选新的GIP受体激动剂, 为糖尿病药物开发提供新的筛选模型。
GIP受体激动剂 药物筛选模型 质粒转染 GIPR agonist drug screening model GFP GFP RIN-m5F RIN-m5F plasmid transfection