随机光学重建显微术（STORM）基于免疫荧光标记技术，具有原理易懂、光路简单、分辨率极高等特点，一直受到科研工作者的青睐，但分辨率的提升对抗体的特异性提出了更高的要求。相较一抗直接标记，“一抗+二抗”的间接标记法在实际应用中普适性更强。二抗相对一抗存在物种特异性的问题，生产时需要对其进行预吸附来提升物种特异性。为了探究二抗物种特异性对双色STORM成像的影响，基于经典的红细胞骨架模型中血影蛋白N端和C端的互斥位置关系，对二者使用高、低吸附二抗标记后分别进行双色STORM成像，对照模拟中有无信号串扰条件下的互相关分析结果，结果表明低吸附二抗会造成二者共定位的假象。进一步，分别通过高、低吸附二抗对MDA-MB-231乳腺癌细胞CD47和PD-L1两种膜蛋白进行双色STORM成像，结果揭示两种蛋白无共定位关系。本研究为二抗物种特异性的评估提供了一种基于红细胞骨架结构模型的超分辨成像新策略，助力双色STORM成像精准阐明蛋白分子互作关系。

骨形态发生蛋白(BMP)属于细胞因子和转化生长因子β(TGF-β)超家族, 在胚胎形态发生和器官形成中起重要作用, 但目前缺乏BMP信号通路 I型受体SAX的各类抗体。本文利用果蝇胚胎提取出总RNA, 反转录得到cDNA, 将其作为模板通过PCR得到sax基因片段, 将片段连接到pCAGGS-P7上, 构建成重组质粒pCAGGS-P7-sax。采用质粒DNA免疫技术, 免疫了BALB/C小鼠, 制备了果蝇SAX蛋白多克隆抗体。进一步分析表明, 构建的真核表达重组质粒pCAGGS-P7-sax DNA具有良好的免疫原性, 在免疫小鼠后所获得的抗血清抗体效价达1∶100。Western blot和果蝇胚胎免疫荧光检测表明, 抗血清能特异型地识别SAX蛋白。果蝇SAX抗体的成功制备为进一步研究sax基因及BMP信号在果蝇心脏发育中的作用奠定了基础。

45S rDNA基因由串联重复序列构成, 是遗传不稳定性的热点区域, 易于发生DNA断裂和重组。以Hela和CHO细胞系为研究对象, 运用荧光原位杂交技术检测有丝分裂不同时期的45S rDNA基因的不稳定性表型。结果表明, 位点特异性的染色体浓缩失败是其在中期染色体上不稳定性的主要表型。具有这种表型的染色体在后期可能会出现落后或粘连现象, 甚至有可能引发断裂, 形成卫星核。同时, 免疫荧光双染色技术检测表明DNA双链断裂的标记蛋白(γH2AX)和RNA聚合酶I的上游结合因子(UBF)在有丝分裂的不同时期都存在共定位现象。该结果为探讨45S rDNA基因的不稳定性与转录的关系提供了直观的细胞学证据。

本研究通过免疫荧光分析，鉴定NTERA-2细胞是否具有精原干细胞特征。研究结果显示，重要精原干细胞标记分子GFRα-1和DDX4在NTERA-2细胞中均表现为阳性表达， NTERA-2细胞具有精原干细胞的特征。初步探讨了重要细胞信号转换蛋白JNK特异性抑制剂SP600125对NTERA-2细胞生长和增殖的影响，为进一步以NTERA-2细胞为精原干细胞模型开展JNK对生殖细胞发育调节功能的研究奠定基础。

以NaYF4为代表的上转换纳米晶作为细胞及组织标记的研究越来越热。 但易团聚,水溶性、生物兼容性差,没有与生物偶联官能团等缺点限制了其应用,因而表面修饰显得尤为重要。 作者通过水热和共沉淀相结合方法,制备了NaYF4:Yb3+,Er3+上转换纳米晶,并对其包覆二氧化硅壳层。 SEM表征硅包覆前后分别为25和250 nm的单分散粒子,说明硅已成功地包覆于纳米晶表面。 980 nm激光照射下,样品的PBS胶体溶液呈可视上转换绿光。 上转换荧光光谱和寿命均表明二氧化硅壳层对其发光性质影响很小。 圆二色谱说明蛋白分子通过戊二醛与纳米晶偶联前后的二级结构基本不变。 基于硅片上的抗原抗体荧光免疫识别试验进一步验证了偶联蛋白分子的特异性,表明该上转换纳米晶适合于生物标记。

首次用谷胱甘肽(GSH)作为稳定剂,在水溶液中制备了稳定地发射绿色荧光和橙色荧光的两种 CdSe/CdS核/壳结构的纳米量子点。 用紫外-可见分光光度和荧光光谱方法研究了CdSe/CdS量子点的发光特性。 透射电镜(TEM)结果表明CdSe/CdS量子点近似球形,在水中分散性良好,比CdSe量子点具有更优异的发光特性,发射光谱和吸收光谱都有红移现象。 将CdSe/CdS量子点与鼠抗人CD3抗体连接,制备了水溶性CdSe/CdS-CD3复合物探针,对人血淋巴细胞进行标记和成像。 结果表明用该探针对人血淋巴细胞成像清晰,其荧光在30 min的连续蓝光激发下无明显衰退,而FITC荧光在20 min内基本完全猝灭。

本文目的是探讨耳蜗组织免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜技术的应用.分离新生大鼠耳蜗,培养于胶原支持物上,采用0.25mM的顺铂作用24h,NF-200免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察顺铂对耳蜗毛细胞和神经元的毒性作用.结果显示,顺铂对培养的耳蜗毛细胞的损伤没有频率特异性,毛细胞缺失可出现在整个基底膜;谷氨酸盐受体抑制剂-CNQX与顺铂同时作用耳蜗基底膜的神经元损伤程度与单纯顺铂组没有明显差别.结论表明,顺铂能够导致耳蜗毛细胞丢失和形态改变,对耳蜗神经元的损伤可能是顺铂对神经元的直接毒性.

方法:利用中性蛋白酶成分、特征性酶抗体的免疫荧光染色和流式细胞仪确定分选肥大细胞亚型,以激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒.结果:三种免疫表型被确定:肥大细胞的类胰蛋白酶阳性(MCT)、类糜蛋白酶阴性;类糜蛋白酶阳性(MCC)、类胰蛋白酶阴性和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性(MCTC).肥大细胞内分泌颗粒分散或聚集存在,分泌颗粒突起分泌或以分散的方式释放.分泌颗粒大范围释放后,肥大细胞的形态结构发生了改变.结论:利用肥大细胞的特征性酶抗体、免疫荧光标记和流式细胞仪可将人组织中的肥大细胞分选纯化为三种亚型;以共聚焦显微镜显示肥大细胞含有丰富的分泌颗粒,它说明肥大细胞具备了为人体I型变态反应提供快速反应的物质基础.

扫描近场光学显微镜突破衍射极限,具有纳米量级的空间分辨率,量子点(QDs)标记有荧光强度高且抗光漂白能力强等优点.结合上述两种技术, 对人胃腺癌SGC-7901细胞膜表面特异性结合的叶酸受体(FR)进行成像探测,获得了叶酸受体在SGC-7901细胞膜表面上的分布,以及细胞内化外源性叶酸过程中叶酸受体在细胞膜表面的分布变化,成像的光学分辨率达到120 nm.实验结果表明:特异性结合的叶酸受体在SGC-7901细胞膜表面的分布,绝大部分是以聚集体的形式存在.随着SGC-7901细胞内化叶酸量的增加,叶酸受体在细胞膜表面的分布密度逐渐降低, 并在经过120 min左右趋于稳定.上述方法和手段为实现单细胞水平上靶点分布和变化的长期监测,肿瘤细胞内化受体的机制研究提供了新的技术途径.