为研究不同半导体激光照射方法对周围神经损伤的影响, 将96只家兔随机分为3周,6周,9周,12周4个观察期组, 每个观察期组又随机分为不同照射方法的治疗组和对照组。建立动物模型后, 各照射组在术后1 d开始照射治疗, 激光功率为10 mW, 每次照射10 min, 每天一次, 连续照射10 d。照射治疗A组对准损伤神经吻合部位进行照射, 照射治疗B组照射家兔L5、L6脊髓节段, 照射治疗C组在对准吻合处进行照射同时还要照射L5、L6脊髓节段, 对照组激光输出功率为零。实验结果表明低能量半导体激光照射能促进轴突再生, 改善再生神经功能, 以同时照射损伤周围神经部位和相应脊髓节段效果最为显著。

人的SLP-2基因是一个新的肿瘤相关基因,它在多个癌组织里高表达,如食管鳞状细胞癌组织和肺癌组织。其中在乳腺癌组织的高表达和病人的存活率负相关,这说明该基因很可能在乳腺癌的发生中发挥重要作用。为了研究SLP-2基因在肿瘤里的功能,将人类SLP-2基因全长编码区定向连入pEGFP-C3质粒, 使SLP-2蛋白可以与绿色荧光蛋白在乳腺癌细胞MCF-7内融合表达。而且细胞荧光实验发现SLP-2蛋白主要定位在MCF-7细胞的胞质内,这为进一步研究SLP-2基因在乳腺癌中的功能奠定了实验基础。

苜蓿的秋眠性是苜蓿引种, 栽培的依据。采用RAPD技术对32份不同秋眠性苜蓿进行遗传多样性和系统发育研究。结果表明, 13条引物共扩增出217个标记, 有214个多态位点, 多态频率达到98.6 %, 说明这些苜蓿品种具有很高的遗传多样性。聚类分析表明, 安徽野生南苜蓿和其它栽培品种苜蓿有大的遗传差异, 单独聚为一类。其余31个品种在相似系数为0.815的地方聚为4类, 并且, 相对秋眠性强的苜蓿品种的遗传基础更为丰富, 而秋眠级数低的苜蓿品种相对遗传基础较狭窄。本研究同时表明, 安徽野生苜蓿将能够为南方苜蓿育种丰富遗传基础, 应加大保护和研究。

利用小波分析对13名志愿者18个血清样品的短波近红外光谱进行去噪预处理, 以血糖仪测定的血糖为参考, 采用间隔偏最小二乘法(iPLS)在700 nm~1 060 nm短波近红外波段建立血糖浓度预测模型。由相关系数(R)和预测标准差(RMSEP)对预测模型的精确度进行了评价。预测模型的相关系数为0.9654, 均方根预测误差为0.2435,并和采用傅立叶变换去噪方法及iPLS建模的结果进行了比较。结果表明: 小波分析预处理数据的方法能更有效地扣除噪声干扰, 使模型具有更强的抗干扰能力和更高的预测精度。

斑马鱼整体原位杂交技术广泛应用于基因表达谱、基因间相互关系和突变体筛选等方面, 是研究斑马鱼发育相关基因功能的重要技术。本文从杂交探针的制备、浓度的选择和洗脱以及胚胎的脱色、蛋白酶K消化、底物显色等方面进行了摸索、改进及简化, 获得了背景低、着色清晰、特异性高的实验结果, 预示了简单实用、成本低廉的斑马鱼整胚原位杂交技术平台的成功建立。

早期龋齿导致牙齿内部脱矿, 使得该区域折射率发生变化, 从而导致其后向散射系数增加。利用一种新型的光学相干层析(OCT)系统可以进行口腔龋齿疾病的诊断。该全光纤系统快速准确地获得了人体正常离体牙和具有龋变的离体牙的OCT图像。对比它们的后向散射系数, 首次发现具有龋变的离体牙齿的后向散射系数是正常离体牙齿组织的数倍。采用此方法可以对龋齿及早期龋齿进行诊断, 对于龋齿早期诊断研究具有重要的意义。

脑卒中是急性的脑部血液循环障碍造成的局部脑损害, 又叫中风或脑血管意外, 是现代中老年人健康的重要威胁, 脑出血是其中的一种情况。采用由引导放松干预治疗的方法对脑出血患者进行护理干预, 通过监测患者的血压、呼吸以及心率变化来判定干预效果, 同时通过CT扫描来判定康复效果。干预结果表明: 引导放松这种护理干预能够通过有效的稳定患者的收缩压和舒张压促进患者的康复。研究表明引导放松干预治疗对脑卒中病人的治疗具有一定的推广应用价值。

现已成熟并仍有巨大潜力的光子学技术与热、电、磁等一起成为研究经络腧穴的热门手段, 经络腧穴光学特性的探索不仅为其存在提供了客观依据, 而且为其实际应用提供了生物物理学依据。总结目前用于经络腧穴研究的光学检测方法原理, 重点综述了经络腧穴的超微弱发光、经脉红外辐射路线的客观显示、腧穴的红外辐射光谱及循经激光传输等方面的最新研究进展, 以期对光子学手段在经络腧穴的研究上有一个全面的认识。

细胞是生物体结构和功能的基本单位, 自被发现以来新的研究方法不断涌现。单细胞拉曼光谱能提供细胞内核酸、蛋白质、脂质含量等大量信息, 可在不损伤细胞的条件下实时动态地监测细胞分子结构变化, 亦可获得细胞的“分子指纹”, 具有敏感性高、实时检测、活样品不需固定或染色、不损伤细胞等众多特点。近年来国内外研究者将拉曼光谱应用于细胞药物处理、细胞水平疾病诊断、单细胞生命活动监测、亚细胞结构等研究, 取得了不同程度的进展。随着研究的深入, 拉曼光谱分析技术必将在干细胞, 癌症研究、细胞分选、药物筛选等领域大有作为。

目的: 对枯草杆菌ylmK基因进行3’端荧光标记以便对其产物YlmK蛋白在菌体中的位置进行初步观察。方法: 以BS168菌株基因组DNA为模板, PCR扩增ylmK基因的3’端序列, 并将其克隆到载体pSG1164中, 形成ylmK’-gfpmut1融合, 构建重组载体pNG424; 将pNG424转化枯草杆菌168菌株, 单交换形成完整的功能性3’端gfpmut1标记的ylmK基因, 菌落PCR对阳性转化子BS362进行鉴定, 用表面荧光显微镜技术对BS362进行观察。结果: 荧光检测结果表明GFP标记的YlmK分布于菌体的外周, 在位置上靠近细胞膜并与之平行排列。结论: YlmK是一种膜蛋白。

蛋白质的亚细胞定位与其生物学功能有密切的关系。以一个新的小鼠N5-谷氨酰胺甲基转移酶基因mHemk的两个转录剪接本mHemk1和mHemk2(GenBank编号分别为AY456393和AY583759)为材料,进一步分析了该蛋白的亚细胞定位。根据生物信息学预测, 在这两个蛋白质C-末端可能分别存在内质网(ER)定位信号RFSK和KSLK, 且这两个蛋白质都可能主要定位于细胞质。分别构建了这两个蛋白质以及相应的删除了C-末端RFSK和KSLK的缺失突变体与加强型绿色荧光蛋白的融合蛋白的表达质粒,并转染到MCF-7细胞中。结果证明mHemk1蛋白中的RFSK基序是一个新的内质网定位信号, 但没有足够的证据支持KSLK基序是mHemk2蛋白的内质网定位信号。这两个转录剪接本蛋白不同的亚细胞定位是否表明它们在不同的亚细胞器内有不同的功能仍值得深入研究。

本文以湘研15号辣椒为材料, 研究了脱落酸(ABA)与镉(Cd2+)在辣椒果实不同发育时期对辣椒素和维生素C含量的影响, 并分析了处理后辣椒素、维生素C含量变化与POD活性以及叶片光合特征之间的关系。结果表明: 湘研15号辣椒植株经ABA与Cd2+处理后果实中辣椒素含量峰值分别比对照提高了80.4 %与61.4 %, POD活性均显著升高, 二者处理后辣椒果实中的辣椒素、POD变化趋势基本一致, 处理后叶片光合速率均有下降趋势。ABA处理后果实中维生素C含量在转色期比对照降低12.8 %~21.7 %, 叶片中叶绿素相对值显著增加; Cd2+处理后果实中维生素C含量在转色期比对照减少18 %~25 %, 红熟期减少13 %~26 %, 叶片叶绿素相对值在红熟期之前比CK显著降低。

通过液培实验, 研究水稻幼苗在盐胁迫下, 镧对水稻幼苗的保护作用。结果表明: 水稻幼苗植株在≤1.5 %的盐浓度的盐胁迫下, 10 mg·L-1镧能提高幼苗植株超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性; 降低幼苗植株脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量和脯氨酸(Pro)的含量; 减小质膜透性; 提高叶片叶绿素含量和叶绿素a/b的比值; 增强根系的活力, 进而促进水稻幼苗的生长。10 mg·L-1镧对盐胁迫的缓解作用与盐浓度有关, 随着盐浓度增大, 镧的缓解作用将逐渐消失。分析表明, 在≤1.0 %和≥0.5 %的盐浓度胁迫下, 镧对水稻幼苗的生长存在更有效的防御机制, 能够促进水稻幼苗的生长代谢。

玉米Δ12脂肪酸脱氢酶是催化油酸形成亚油酸的关键酶。将其编码基因FAD2(GenBank登陆号: DQ496227)克隆到酿酒酵母表达载体pYES2.0中, 构建成重组质粒pYE/FAD2, 转化到酿酒酵母进行诱导表达, 同时以pYES2.0转化子为对照。气相色谱(GC)分析表明, 重组转化子亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的1.54 %, 而对照未检测到亚油酸。表明FAD2基因具有编码△12脂肪酸脱氢酶的功能。为探索转译起始密码子周边序列的改变对FAD2基因表达产生的影响, 将该基因的起始密码子上游序列进行修改, 构建重组表达载体pYE/FAD2-1, 转化酿酒酵母进行表达。GC分析表明, pYE/FAD2-1转化子的亚油酸含量占总脂肪酸含量的8.81 %, 是对照pYE/FAD2转化子的近5倍。

目的: 研究喘可治对辐射损伤后小鼠造血和免疫重建的影响。方法: 建立小鼠辐射损伤模型, 通过腹腔注射给药喘可治(CKZ)和重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor, rhG-CSF)注射液, 利用血细胞自动分析仪和流式细胞术分析辐射后小鼠外周血象和骨髓干细胞的变化规律。结果: CKZ组外周血象显示造血和免疫系统恢复显著高于rhG-CSF组, P<0.05; 骨髓干细胞虽有一定恢复, 但不如rhG-CSF组, P<0.05。结论: 喘可治可促进辐射损伤后小鼠造血和免疫重建, 促进骨髓干、祖细胞的释放与分化可能是其机制之一。

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫早熟株, 运用Jeffers建立的早熟系选育方法对毒害艾美耳球虫(E.necatrix)山西分离株进行了早熟选育, 并观察其内生发育。结果表明, 经过海兰白雏鸡8次传代之后, E.necatrix潜隐期由146.5 h缩短至139 h, 排卵高峰期由168 h提前至156 h; 其虫体各个发育阶段与亲本株相似, 但第二代裂殖体明显小于亲本株, 且出现的高峰提前。

目的: 研究1.06 μm激光所致人手背皮肤的痛觉效应。方法: 以输出波长为1.06 μm的脉冲Nd: YAG激光照射人手背皮肤, 记录每次刺激激光的能量以及受试者的反应。采用加权概率单位算法计算诱发痛觉概率为50 %时对应的激光剂量ED50, 即为痛觉阈值。改变光斑大小和脉冲宽度, 测定三种不同刺激条件下的痛觉阈值, 并探索温度对激光所致痛觉效应的影响。结果: 当皮肤温度约为30 ℃, 分别使用光斑直径1.20 mm、脉冲宽度85 μs, 光斑直径1.20 mm、脉冲宽度20 ns和光斑直径2.56 mm、脉冲宽度20 ns的激光刺激时, 痛觉阈值分别为394 mJ/mm2、36.4 mJ/mm2和8.92 mJ/mm2。在第一种刺激条件下, 当皮肤温度为25 ℃时, 剂量为383 mJ/mm2的激光诱发痛觉的概率为16.7 %; 当皮肤温度为39 ℃时, 剂量为361 mJ/mm2的激光诱发痛觉的概率为56.7 %。结论: 1.06 μm激光所致痛觉的阈值随脉冲宽度的减小、光斑面积的增大和皮肤表面温度的增加而减小。

自安徽、山东、湖北、江苏等地多点采集棉花红腐病、水稻恶苗病、玉米穗腐病的病组织, 经分离、鉴定和纯化, 获得107个串珠镰孢(Fusarium moniliforme)菌株。对上述来源于棉花、水稻、玉米的串珠镰孢的菌落形态、生长速率和产孢量等生物学性状及其在无性后代的遗传与变异进行了研究。结果表明, 不同寄主来源的串珠镰孢菌株的菌丝生长温度范围和最适温度大致相同, 但在菌落形态特别是色素方面存在明显差异, 生长速率和产孢量也存在显著差异。棉花菌株的平均生长速率最大, 玉米菌株生长速率最小, 水稻菌株生长速率居中, 相同群体的不同菌株间生长速率有极显著差异; 玉米菌株产孢量最大, 棉花菌株产孢量最小, 水稻菌株产孢量居中。方差分析显示, 不同寄主菌株群体间产孢量存在显著差异, 而同一寄主群体的不同菌株间产孢量均无显著差异, 说明菌株产孢量大小主要与其寄主种类有关, 而与地区来源关系不大。遗传测定结果表明, 分离自棉花、玉米和水稻的串珠镰孢的菌落形态和生长速率在单分生孢子后代均可稳定遗传; 产孢量性状遗传有两种情况: 分离自棉花和水稻的串珠镰孢菌株Fm1和Fm31的产孢量性状在单分生孢子后代均可稳定遗传, 而分离自玉米的串珠镰孢菌株Fm19的产孢量性状在单分生孢子第一代(CG1)发生变异。

利用黄牛基因组cDNA和氨基酸数据库对P450基因进行搜索和分析, 结果显示: 在黄牛基因组中发现64个P450基因, 分别属于18个P450家族和38个亚家族。以氨基酸序列相似度大于60 %为标准对黄牛P450基因进行分组, 32个为孤儿基因, 其余32个可归入9个组, 其中7个组适合于正选择和基因转换分析。结果表明: 有3个组显著受到正选择压力作用, 其中的2个组有正选择概率大于95 %的氨基酸位点, 分别位于底物识别位点SRS1和SRS2; 有5个组显示显著的基因转换事件; 既显著受到正选择压力作用, 又参与基因转换的基因共4个。可见, 发生基因转换的基因与受到显著正选择的基因有一定的相关性。此外, 鉴定出20个不同的基序, 其中有6条基序在90 ％以上的基因中出现。

目的: 将人血管内皮生长因子165(hVEGF165) 导入原代离体成肌细胞,观察该细胞hVEGF分泌情况,探讨成人自体转基因成肌细胞移植的可行性。方法: 采用两步消化法对成人骨骼肌组织消化获取相对较纯的成肌细胞, 通过差速贴壁法进行进一步的纯化。以脂质体转染法将pcDNA3.1-hVEGF165导入成肌细胞, 通过RT-PCR、 ELISA和Western-blot进行hVEGF165定量检测, MTT 测定和Mile’s 实验检测VEGF165的生物学活性。结果: 转基因细胞经RT-PCR 扩增出一条VEGF的特异性泳带, ELISA 显示转基因细胞培养上清VEGF 浓度分别达到18.92±1.77 ng/mL、19.04±2.15 ng/mL, Western blot检测转基因成肌细胞上清均检测到VEGF蛋白特异性的杂交带, MTT 显示转基因细胞上清明显促内皮细胞增殖,Mile’s 实验显示转基因细胞上清明显增加毛细血管通透性。结论: 质粒pcDNA3.1-hVEGF165能成功转入成人成肌细胞,转基因细胞能分泌有生物活性的VEGF165蛋白。

采用RT-PCR法克隆了柳蚕S3a基因序列, 并通过构建重组质粒, 对其进行了原核表达及蛋白纯化。柳蚕S3a基因ORF长度为795 bp, 编码264个氨基酸, 预测蛋白的等电点和分子量大小分别为9.74和30 kD。序列比对及进化关系表明, 柳蚕S3a蛋白与其他物种S3a蛋白相似度介于71 % 和97 %之间, 其中与鳞翅目昆虫的同源性最高。SDS-PAGE和Western blotting结果显示柳蚕S3a在大肠杆菌中获得了高效表达, 分离获得的重组蛋白的纯度较高。

心力衰竭已经成为人类健康的杀手, 其发病机制有待阐明。wg基因直接调控心脏前体细胞的形成和特化过程, 但其是否参与心力衰竭发生的过程尚不得而知。利用心力衰竭果蝇模型研究基因wg与心力衰竭的关系, 结果表明两个wg基因突变杂合子的心力衰竭率分别高达52 %和43 %, 而野生型对照组仅为25 %, 统计学分析差异显著, 表明wg可能与心力衰竭的发生有关。

从人类心脏文库中成功克隆了一个新的含有锚蛋白重复序列及SOCS盒结构域蛋白(Ankyrin repeat and SOCS box protein, ASB)的家族成员ASB10。该基因定位于染色体7q36.1, 开放阅读框包含1 329个核苷酸, 由7个锚蛋白重复序列和1个SOCS盒组成, 编码452个氨基酸,分子量大约是49.5 kD。物种间的进化型分析比较表明该基因是非常保守的, 人的ASB10基因和小鼠的Asb10基因有84.8 %的同源性。半定量RT-PCR实验结果证明Asb10基因在成年小鼠的心脏和肌肉组织中高表达, 提示其可能与心脏和肌肉组织的发育有关。亚细胞定位显示ASB10蛋白在细胞质和细胞核均有表达, 为进一步研究奠定了基础。

应用种群累积培养法, 就培养液pH值对大乳头水螅(Hydra magnipapillata)的生存、种群增长、无性生殖以及水螅的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)3种抗氧化酶活力的影响进行了探讨。结果表明, 水螅存活的pH上限为10.5, 下限为4.0, 水螅存活的最适pH范围为5.5～9.5; pH值对水螅种群增长有显著影响, 种群密度及种群瞬时增长率均随pH的不同而明显改变。培养15 d后, 除了pH 4.0时水螅种群为负增长外, 其他pH梯度下的水螅种群为正增长, 其中pH 6.5时水螅种群密度最高。以pH 6.5为起始点, 随着培养液酸性或碱性的增强, 水螅种群密度整体都呈递减趋势。水螅SOD活力的转折点在pH 6.5, 当pH值偏离 6.5时(酸性或碱性增强), 水螅SOD活力整体呈明显上升趋势; 但水螅GSH-PX和CAT活力的转折点却在pH 7.0, 当pH值偏离7.0时(酸性或碱性增强)GSH-PX和CAT活力整体呈明显下降趋势。pH 6.5时水螅SOD活力最低与pH 6.5实验组水螅的无性出芽生殖率最高之间可能存在一定的内在联系。本文研究结果可为实验室培养水螅提供适宜的pH值指标。

为了研究梨石细胞形成与木质素合成的关系, 以砀山酥梨果实为材料, 通过基于同源性的RT-PCR方法, 克隆木质素合成途径中的关键酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因。同时利用基因数据库资料对克隆的PAL序列进行比较分析。结果表明, 从砀山酥梨果实中克隆的PAL基因cDNA片段长度为585 bp, 推断其编码195个氨基酸序列。该序列包含与其它植物PAL相同的活性催化位点, 经序列分析和同源性比对, 该氨基酸序列与其它植物PAL氨基酸序列的同源性在90 %以上。系统进化树分析表明, 砀山酥梨PAL氨基酸序列与蔷薇科的甜樱桃PAL氨基酸序列聚类关系最近。