1 湖南文理学院, 水产高效健康生产湖南省协同创新中心, 环洞庭水产健康养殖及加工湖南省重点实验室,动物学湖南省高校重点实验室, 湖南 常德 415000
2 湖南文理学院-大湖水殖股份有限公司教育部农科教合作人才培养基地, 湖南 常德 415000
3 淡水鱼类发育生物学国家重点实验室, 湖南 长沙 410081
为了给甲鱼病害防控的合理用药提供技术支持, 本研究自2018年4至5月采集了湖南常德某甲鱼养殖场急性死亡病样, 进行了病原分离、鉴定与药敏分析。试验采用无菌穿刺接种法从濒临死亡的病鳖肝脏中分离出1株病原菌, 命名为HTG。利用血琼脂平板对该病原菌进行毒力检测, 结合形态观察与16S rDNA序列分析法进行鉴定, 采用K-B纸片扩散法对病原菌进行药敏分析。毒力检测显示HTG在血琼脂平板上呈β溶血；16S rDNA序列分析表明HTG与Aeromonas hydrophila strain JCM 1027的16S rDNA基因的核苷酸序列同源, 相似性为100%, 结合形态特征将HTG鉴定为嗜水气单胞菌；药敏分析结果显示HTG对多西环素高度敏感(抑菌圈直径达30 mm)。根据药敏分析结果, 建议该养殖场采用内服多西环素,辅以保肝护肝渔药对该病进行防控。
甲鱼 急性死亡 病原菌 药敏分析 Trionyx sinensis acute death pathogenic bacteria 16S rDNA 16S rDNA drug sensitivity analysis
1 省部共建淡水鱼类发育生物学重点实验室, 湖南师范大学生命科学学院, 湖南 长沙 410081
2 汉寿县特种水产科学研究所, 湖南 常德 415900
本文以汉寿中华鳖为研究材料, 比较分析中华鳖线粒体细胞色素b基因(Cytb)与瑞鳖、砂鳖等的差异, 为探讨其进化与遗传分子标记奠定实验基础。采用PCR技术, 克隆汉寿中华鳖Cytb基因的序列, 并检测其在不同组织以及不同生长发育时期的表达模式, 最后通过分子进化树分析中华鳖与砂鳖的亲缘关系。通过克隆发现中华鳖细胞色素b基因的mRNA开放阅读框含有1 140 bp, 其碱基组成为A+T的含量(61.1%)高于G+C(38.9%), 编码379个氨基酸残基的序列。与山瑞鳖和砂鳖氨基酸序列比较发现, 中华鳖与瑞鳖和砂鳖均存在一定差异; Cytb基因在中华鳖不同组织和各个不同发育时期中均有表达, 且在精巢组织中表达量最高, 在不同时期阶段呈“低-高-低”曲线表达模式; 分子进化树分析发现汉寿中华鳖与砂鳖具有较强的亲缘关系, 但是在Cytb中仍存在差异, 所以能够很好的把它们区分开来。此外汉寿中华鳖与哺乳动物、鱼类和爬行类均存在巨大差异。结果表明, Cytb基因在探讨汉寿中华鳖的进化与遗传分子标记中具有重要意义, 可作为分析中华鳖种属进化系统发育特性和群体遗传多样性的标记基因。
中华鳖 线粒体细胞色素b 克隆 遗传多样性 Trionyx sinensis mitochondria cytochrome b cloning genetic diversity
