1 湖南师范大学医学院, 长沙 410013
2 长沙市第九医院检验科, 长沙 410004
3 中南大学湘雅三医院, 长沙 410013
研究慢阻肺合并肺部感染患者的病原菌分布及药敏情况, 以期为临床抗生素的正确使用提供依据。从长沙某医院2017年3月—2022年2月慢阻肺合并肺部感染患者痰培养标本检出的病原菌中随机筛选了1?500株进行培养鉴定及药敏试验, 统计并分析病原菌的分布情况以及检出的主要革兰氏阴性菌(肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌)的耐药特点及趋势。结果发现: 1 500株病原菌中共检出革兰氏阴性菌1 251株(83.40%), 其中比例居前的分别是肺炎克雷伯菌384株(25.60%)、铜绿假单胞菌333株(22.20%)和鲍曼不动杆菌303株(20.20%); 革兰氏阳性菌126株(8.40%), 其中比例居前的分别是金黄色葡萄球菌69株(4.60%)、肺炎链球菌27株(1.80%); 真菌123株(8.20%), 主要为白色念珠菌96株(6.40%)。药敏分析结果显示: 肺炎克雷伯菌对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢他啶及氨曲南的耐药率变化具有统计学意义(P<0.05); 铜绿假单胞菌对于氨曲南的耐药趋势具有统计学意义(P<0.05); 鲍曼不动杆菌对于大多数抗菌药物均具有较高的耐药率, 且对于左氧氟沙星、复方新诺明、美罗培南的耐药趋势具有统计学意义(P<0.05)。抗感染是治疗慢阻肺的一个重要措施, 及时正确的选择敏感抗生素是关键环节。本研究为临床精准选择合适的抗菌药物治疗慢阻肺提供了帮助, 同时有助于了解本地区细菌耐药的发展趋势, 具有重要的临床价值和意义。
慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺) 肺部感染 病原菌分布 药物敏感性 细菌耐药 chronic obstructive pulmonary disease (COPD) pulmonary infection distribution of pathogenic bacteria drug sensitivity bacterial resistance
1 湖南师范大学 医学院, 长沙 410013
2 长沙市第九医院检验科, 长沙 410004
3 湖南师范大学 生命科学学院, 长沙 410081
心脏神经脊衍生物表达转录因子2(Hand2)是bHLH家族的成员, 也称为dHand、Hed和Thing2, 可在人以及鼠、鸡、斑马鱼、果蝇等模式动物中表达。国内外的研究显示, Hand2主要影响右心室的发育, 在维持右心室祖细胞和右心室形态发生中起关键作用。为了进一步研究Hand2基因参与心脏发育的作用机制, 拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建斑马鱼Hand2基因敲除品系。根据生物信息学网站的分析筛选出最优的两个靶位点, 设计并合成引物, 利用PCR扩增得到Hand2基因sgRNA的cDNA, 再转录为mRNA, 将两个靶位点sgRNA的mRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎的Ⅰ-细胞期。在斑马鱼的胚胎和成鱼时期进行基因敲除的有效性检测, 发现在靶位点附近有碱基的缺失和插入, 表明CRISPR/Cas9对斑马鱼Hand2基因敲除是有效的。本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了斑马鱼的Hand2基因敲除模型, 为后期研究Hand2基因在人类疾病中的作用机制和新型治疗靶点的临床开发等奠定了基础。
斑马鱼 Hand2基因 基因敲除 治疗靶点 zebrafish Hand2 gene CRISPR/Cas9 CRISPR/Cas9 gene-knockout therapeutic targets
1 湖南师范大学医学院, 湖南 长沙 410013
2 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
3 中南大学湘雅二医院, 湖南 长沙 410011
ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体；利用斑马鱼Asb11的cDNA构建pCAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,肌肉注射入6-8周龄的BALB/c小鼠体内,诱导抗原蛋白的表达和免疫应答的发生。结果显示,制备的pCAGGS-P7/ASB11重组质粒具有较好的免疫原性；将提取的抗血清进行Western-blot和免疫荧光检测,显示所制备的多克隆抗体抗体效价为1∶400,抗血清抗体能特异的结合ASB11蛋白。本研究为后续的功能研究奠定了基础。
多克隆抗体 DNA免疫技术 Asb11 Asb11 polyclonal antibody DNA immunization
1 常德市第一人民医院, 湖南 常德 415003
2 湖南师范大学医学院, 湖南 长沙 410013
3 中南大学湘雅三医院, 湖南 长沙 410013
为了了解湖南长沙某医院临床分离的肺炎克雷伯菌中质粒介导AmpC β-内酰胺酶的产生情况及其基因型, 收集了该医院2008年3月至2010年10月临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌104株, 用头孢西丁纸片扩散法对这些菌株进行表型初筛, 用多重PCR确定ampC耐药基因型；结果发现其中有19株对头孢西丁纸片不敏感, 疑为产AmpC酶菌株；再经多重PCR扩增, 有12株菌分别在约400 bp(11株)和约350 bp(1株)出现了阳性条带, 特异性PCR证明此12株菌分别携带了DHA型(11株)和ACC型(1株)ampC耐药基因；产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率为11.5%(12/104)。该医院产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的分离率较高, 应对其检测与监测给予足够重视, 以指导临床合理选用抗菌药物。
肺炎克雷伯菌 质粒 AmpC β-内酰胺酶 多重PCR Klebsiella pneumoniae plasmid AmpC β-lactamases multiplex PCR
湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
odd是一个新发现的心脏特异表达基因。为了进一步研究odd在心脏发育中的功能, 根据已报道的odd基因序列, 以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增, 将所得的odd部分编码区序列连接到pET-28a载体上构建原核表达载体; 重组子经酶切测序鉴定后, 转化到大肠杆菌BL21菌株, IPTG诱导融合蛋白表达, Ni-IDA凝胶柱亲和纯化, 纯化后的His-odd融合蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体, Western Blot检测抗体活性。结果表明, 获得了odd原核表达重组融合蛋白以及高效价的、特异性兔抗Odd多克隆抗体, 为后续的odd功能研究奠定了基础。
融合蛋白 原核表达 多克隆抗体 odd odd fusion protein prokaryotic expression polyclonal antibody
1 南华大学药学与生命科学学院, 湖南 衡阳421001
2 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙410006
人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因, 其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域, 实验表明人类KLHL31在成体骨骼肌和心肌组织中特异表达, KLHL31蛋白的过表达可以抑制了AP-1与SRE的活性。本文拟利用阳离子聚合物转染技术将重组表达质粒pCMV-tag2B-KLHL31转染H9c2细胞, 通过G418筛选, RT-PCR和Western blotting验证, 建立稳定过表达KLHL31基因的细胞系H9c2- KLHL31, 为研究KLHL31在心脏发育及其相关功能提供有用的细胞研究模型。
人KLHL31 稳定细胞系 human KLHL31 MAPK MAPK H9c2 H9c2 stable cell line
