蔡英桂 1,2,*尹丽阳 2王宏波 1,2陈宇 2[ ... ]叶湘漓 1,2
作者单位
摘要
1 湖南师范大学医学院, 湖南 长沙 410013
2 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
3 中南大学湘雅二医院, 湖南 长沙 410011
ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的cDNA构建pCAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,肌肉注射入6-8周龄的BALB/c小鼠体内,诱导抗原蛋白的表达和免疫应答的发生。结果显示,制备的pCAGGS-P7/ASB11重组质粒具有较好的免疫原性;将提取的抗血清进行Western-blot和免疫荧光检测,显示所制备的多克隆抗体抗体效价为1∶400,抗血清抗体能特异的结合ASB11蛋白。本研究为后续的功能研究奠定了基础。
多克隆抗体 DNA免疫技术 Asb11 Asb11 polyclonal antibody DNA immunization 
激光生物学报
2018, 27(3): 260
作者单位
摘要
湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,教育部重点实验室,生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙410081
Asb11基因被报道与斑马鱼Notch信号的激活有关,本研究室过去的研究显示该基因在心肌和骨骼肌中特异性表达。因此推测Asb11基因可能是心脏发育相关候选基因。为了阐明Asb11基因在斑马鱼心脏发育过程中的作用,本文利用CRISPR/Cas9打靶技术构建敲除Asb11基因的斑马鱼品系。首先在线分析筛选出Asb11基因最适合的打靶位点,然后PCR扩增出Asb11基因gRNA的双链cDNA,再将Asb11基因的gRNA和Hcas9的mRNA共同注射到斑马鱼胚胎Ⅰ细胞期胚胎中。进行打靶的有效性检测,发现Asb11基因的一号外显子出现了碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9 系统对Asb11基因的敲除是有效的。对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得了Asb11基因敲除的斑马鱼品系,为探究Asb11在心脏发育中的作用奠定了基础。
斑马鱼 Asb11基因 zebrafish Asb11 CRISPR/Cas9 CRISPR/Cas9 
激光生物学报
2018, 27(3): 252

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