蔡英桂 1,2,*尹丽阳 2王宏波 1,2陈宇 2[ ... ]叶湘漓 1,2
作者单位
摘要
1 湖南师范大学医学院, 湖南 长沙 410013
2 湖南师范大学生命科学学院心脏发育研究中心, 湖南 长沙 410081
3 中南大学湘雅二医院, 湖南 长沙 410011
ASB11参与胚胎神经祖细胞的发育、再生性肌发生以及泛素化等过程,但其机制仍不清楚。为了进一步研究斑马鱼Asb11基因的作用机制,本研究采用DNA免疫技术制备了ASB11多克隆抗体;利用斑马鱼Asb11的cDNA构建pCAGGS-P7/ASB11重组表达质粒,肌肉注射入6-8周龄的BALB/c小鼠体内,诱导抗原蛋白的表达和免疫应答的发生。结果显示,制备的pCAGGS-P7/ASB11重组质粒具有较好的免疫原性;将提取的抗血清进行Western-blot和免疫荧光检测,显示所制备的多克隆抗体抗体效价为1∶400,抗血清抗体能特异的结合ASB11蛋白。本研究为后续的功能研究奠定了基础。
多克隆抗体 DNA免疫技术 Asb11 Asb11 polyclonal antibody DNA immunization 
激光生物学报
2018, 27(3): 260
作者单位
摘要
湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室, 心脏发育研究中心, 湖南 长沙410081
已有研究表明RMND5B可能与心肌肥大相关, 但具体机制不明, RMND5B的重组腺病毒载体的构建和鉴定为研究RMND5B功能提供了基础工具。首先, 设计小鼠RMND5B基因的特异性引物, 以cDNA为模板, PCR扩增RMND5B ORF区, 并在两端各加入Hind Ⅲ及SalⅠ的酶切位点。将此片段插入到pMD18-T载体, 再亚克隆至线性化的穿梭质粒pAdTrack-CMV中。PmeⅠ酶切线性化之后, 电转化到含pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中。在BJ5183细菌中发生同源重组获得了重组质粒pAd-RMND5B质粒。PacⅠ酶切线性化之后转染293A细胞, 经过包装获得腺病毒AdRMND5B。将此腺病毒感染新生大鼠原代心肌细胞, 并在一段时间后观察绿色荧光并通过RT-PCR检测RMND5B的表达情况。结果表明, 成功构建了RMND5B的重组腺病毒载体并实现了AdRMND5B在新生大鼠原代心肌细胞中表达, 为进一步研究RMND5B基因在心肌肥大中的作用奠定了良好的实验基础。
腺病毒 心肌细胞 adenovirus RMND5B RMND5B cardiomyocyte 
激光生物学报
2016, 25(4): 349

关于本站 Cookie 的使用提示

中国光学期刊网使用基于 cookie 的技术来更好地为您提供各项服务,点击此处了解我们的隐私策略。 如您需继续使用本网站,请您授权我们使用本地 cookie 来保存部分信息。
全站搜索
您最值得信赖的光电行业旗舰网络服务平台!