肿瘤干细胞(cancerstem cells, CSCs)是在肿瘤组织中具有干细胞特性的细胞亚群, 它具有正常干细胞的多向分化潜能, 能够无限增值和自主分化为各种具有异质性的肿瘤细胞。CSCs在肿瘤的发生、生长、转移中起着重要作用。同时, CSCs 对目前大多数治疗如化疗、放疗不敏感, 甚至具有耐药性, 这也就导致了恶性肿瘤在治疗后容易复发。鉴于此, 针对肿瘤干细胞的治疗日益受到关注, 光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)由于其微创性, 不良反应少, 靶向性强等特点在肿瘤的治疗研究中不断得到发展。本文将从CSCs的特性入手, 结合PDT治疗的最新进展, 探讨PDT治疗在肿瘤干细胞治疗中的应用。

本研究构建急性大鼠脊髓夹伤模型, 并将大鼠随机分为单纯脊髓损伤对照组及脊髓损伤联合弱激光照射组。照射组应用810 nm波长, 150 mW照射功率, 照射光斑0.3 cm2的弱激光对脊髓损伤区进行经皮照射, 连续照射3天, 7天或14天。应用免疫荧光、免疫印迹实验方法, 测定脊髓损伤区巨噬细胞及小胶质细胞的极化表达。应用酶联免疫吸附法测定脊髓损伤区白细胞介素4的表达情况。应用坚牢蓝髓鞘染色测定两组损伤脊髓中髓鞘保留的差异。采用BBB评分对两组大鼠后肢运动功能的恢复进行评估。结果表明, 810 nm弱激光对脊髓损伤区连续照射3天, 7天后, 可显著减少M1型巨噬细胞及其标志物诱导型一氧化氮合酶的表达, 在7天时间增加M2型巨噬细胞及其标志物精氨酸酶1的表达。弱激光照射组白细胞介素4的表达明显增加。损伤后14天, 弱激光照射组脊髓损伤区髓鞘保留面积比值明显提高。损伤后7天及14天时, 弱激光照射组大鼠的BBB评分明显升高。该实验结果表明, 810 nm弱激光经皮照射, 可增加大鼠急性脊髓损伤区M2型巨噬细胞及小胶质细胞的表达, 并减少脊髓损伤后的髓鞘脱失, 促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复。

目的: 用二次谐波成像结合双光子荧光成像的方法观察人源胶原蛋白透皮吸收的情况。方法: 将荧光标记的人源胶原蛋白(1 mg/mL)涂抹于小鼠表皮层经皮肤吸收1 h后用背向二次谐波观察皮肤内胶原纤维作为真皮层定位标志, 用双光子扫描共聚焦显微镜观察人源胶原蛋白透皮吸收深度, 吸收方式。结果: 二次谐波成像结合双光子荧光成像表明人源胶原蛋白透皮吸收1 h后可观察到荧光信号沿着毛囊聚集, 并有部分荧光分子由毛囊扩散至真皮层。结论: 二次谐波可以更快速, 更灵敏地检测皮肤中的胶原纤维, 以此作为检测物质透皮吸收深度的定位标志, 具有不受荧光信号干扰的优点。人源胶原蛋白可以沿着毛囊进入真皮层, 并从毛囊中扩散至胶原纤维层从而补充皮肤中的胶原纤维。

文章主要研究叶酸修饰硫掺杂二氧化钛(FA-S-TiO2)纳米颗粒光催化灭活作用并初步探讨FA-S-TiO2增强了TiO2光催化灭活效率的作用机理。利用固相反应的方法制备了S-TiO2, 并利用表面修饰的方法制备了FA-S-TiO2。通过紫外-可见光吸收光谱(UV-Vis),荧光光谱, 傅里叶红外光谱(FTIR), 透射电镜(TEM)等手段对样品进行了表征。利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分别检测TiO2、S-TiO2、FA-S-TiO2对HL60细胞的灭活效应, 并采用活性氧检测等方法进行了分析研究。细胞实验结果表明, 在暗室条件下, 随着叶酸修饰S-TiO2的比例增加, 细胞的存活率随之减少; 在光照条件下, 细胞的存活率明显下降。其中FA-S-TiO2样品1对HL60细胞的灭活效率最高, 达到72%。其相应的活性氧含量也是最高。同时, 通过荧光光谱推测FA-S-TiO2提高HL60细胞对该纳米颗粒摄取效率, 进而增强PDT灭活效果。

针对MODIS数据绿潮提取存在大量混合像元导致绿潮覆盖面积偏大这一问题, 基于3 m分辨率的机载SAR高分影像, 结合归一化植被指数(NDVI), 对MODIS研究区中大于NDVI阈值的像元进行混合像元分解得到绿潮的“覆盖面积”; 获取的准同步3 m机载SAR提取的绿潮面积为“真实值”, 然后建立二者之间的关系模型, 并选取不同的样本区域对该模型进行了验证。实验结果表明: NDVI等传统算法所提取的绿潮覆盖面积约为“真实值”的2.68倍; 基于混合像元分解的方法所提取的绿潮面积较“真实值”偏小, 约为“真值”的0.56倍; 与传统的NDVI等多波段比值法相比, 该精细化模型方法提取的绿潮覆盖面积更接近于“真实值”, 与“真实值”误差仅为6.7%。

目的: 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在骨肉瘤U2OS细胞多柔比星(DOX)耐药中的作用及相关分子机制。方法: 体外培养U2OS细胞, 建立U2OS-DOX耐药株, 分为U2OS-WT组和U2OS-DOX组。采用siRNA HO-1转染U2OS-DOX细胞, CCK-8法检测细胞活性; RT-PCR法检测缺氧诱导因子1 (HIF-1α)及HO-1的mRNA表达; WB法检测HIF-1α及HO-1的蛋白表达水平; 流式细胞仪检测罗丹明Rh123在细胞内的蓄积。结果: DOX可降低U2OS细胞活性并随剂量的增加愈加明显, 这种诱导作用可以被抗氧化剂(NAC)所逆转(P＜0.01)。U2OS-DOX组HIF-1α及HO-1的mRNA和蛋白表达以及P糖蛋白(P-gp)表达水平均显著增加(P＜0.05)。转染可恢复U2OS-DOX细胞对DOX化疗敏感性并增加其对Rh123的蓄积(P＜0.001)。结论: HO-1可能通过抗氧化应激、增加化疗药物的蓄积等机制发挥U2OS细胞对DOX的耐药性。

目的:获取不同黑色素瘤发展阶段的荷瘤鼠的最佳治疗时间以及最佳用药量。方法:将肿瘤大小不等的雄性黑色素瘤荷瘤鼠进行内皮抑素分组对比治疗, 在用药3、5、7天后处死荷瘤鼠, 剥离瘤体, 称瘤重, 分析生长趋势, 做病理切片并进行HE染色和免疫组化。在与对照组进行对照后, 根据肿瘤的大小、恶性化的程度以及CD31和VEGF的表达情况, 找出内皮抑素的用药最有效的治疗时间窗。然后通过进一步实验, 在已经检测出的不同肿瘤大小的荷瘤鼠的恩度作用时间窗内, 给荷瘤鼠使用用不同浓度梯度的药物, 在不同肿瘤发展大小之后剥离瘤体, 做与上述类似的操作并分析, 确定在治疗时间窗时的恩度使用的最佳剂量。结论:5天为内皮抑素抗黑色素瘤血管新生时间窗, 两个实验组中, 中等剂量即15 mg/kg和20 mg/kg为恩度作用最佳剂量。

目的: 探索沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)持续感染状态下, NOD1、IL-6及STAT3分子的表达情况和相互关系。方法: 利用HeLa229细胞或STAT3基因沉默的HeLa229细胞, 分别建立沙眼衣原体的急性感染和持续感染模型; 应用Western Blot及ELISA等方法检测不同感染状态下STAT3及NOD1 蛋白表达水平以及细胞因子IL-6的分泌水平。结果: HeLa229细胞在Ct感染状态下, STAT3和NOD1以及IL-6表达水平均升高, 且于持续感染状态下的升高较急性感染状态下的升高更明显; 沉默STAT3基因后, Ct感染的细胞NOD1及IL-6的表达水平下降明显。结论: HeLa229细胞在Ct持续感染状态下, STAT3能上调NOD1及IL-6表达水平, 上述分子间存在NOD1-IL-6-STAT3正反馈信号通路。

探讨玉竹多糖(Polygonatum odoratun polysaccharides, POP)对流感病毒裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效果。以BALB/c小鼠为模型, 将H7N9流感病毒裂解疫苗单独或者添加不同剂量的POP(400、600、800、1 000和1 200 μg)做佐剂一次性滴鼻免疫小鼠, 免疫三周后小鼠以致死剂量同源病毒攻击。实验结果表明, 当在疫苗中加入1 000 μg POP时, 与疫苗单独免疫相比, 单次滴鼻免疫就明显增强了小鼠抵抗致死量病毒感染的能力, 体重丢失减少, 肺部残余病毒滴度下降, 存活率提高; 血清中疫苗特异性IgG抗体和HI抗体以及鼻洗液中SIgA抗体都提高了; IgG亚类抗体检测显示, POP的加入显著增加了IgG1的抗体滴度, 但抑制了IgG2a的产生, 说明诱导的免疫应答偏向于Th2型。实验表明POP在一定剂量时能增强疫苗诱导的免疫应答, 显示出黏膜佐剂效应。

本文采用形态学方法, 并结合28S rDNA序列分析对分离自红树植物海马齿(Sesuvium portulacastrum)的1株内生真菌BY1进行鉴定。结果表明菌株BY1的菌落和显微形态与曲霉属典型特征相符, 其28S rDNA序列与矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus NRRL 4741, 登录号AF459727.1)相似度达100%, 系统发育关系也显示其与矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus NRRL 4741)亲缘关系最近, 位于同一分支。因此将菌株BY1鉴定为矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus)。

采用DNS法、离子色谱法和气质联用(GC-MS)技术对油菜秸秆蒸汽爆破降解产物进行了分析。结果表明, 经蒸汽爆破处理后的油菜秸秆酶解产糖量有明显的提高, 为未处理样品直接酶解含量的3.4倍, 各种水溶性糖化合物的含量也大大提高, 其中葡萄糖和木糖含量分别为未处理样品直接酶解含量的3.5倍和4.7倍之多。水提液乙酸乙酯萃取物中分别检测到脂肪酸类、芳香类和呋喃类物质40、12和1种。通过扫描电镜观察处理后油菜秸秆的表面形貌结构, 发现处理后的秸秆表面结构松散, 比表面积增大, 酶对纤维素的可及性增加。

本试验旨在研究用部分麦麸替代基础日粮中的玉米对蛋鸡生产性能的影响。选取24周龄的海兰褐蛋鸡600只, 随机分为5组, 每组6个重复, 每个重复20只。对照组饲喂基础日粮, 试验组分别饲喂麦麸替代基础日粮中玉米的5%, 10%, 15%, 20%的试验日粮, 预饲期7 d, 正式试验期35 d。结果表明: 麦麸替代玉米提高了平均日采食量、平均蛋重、产蛋率、料蛋比、蛋比重和哈夫单位(P＜0.05)。试验表明, 麦麸替代玉米, 可以提高蛋鸡生产性能, 改善蛋品质, 且替代10%的玉米效果最佳。

文章采用溶胶凝胶法制备核壳CdTe/TiO2复合纳米颗粒, 探讨了该复合纳米颗粒体外PDT对HL60细胞的灭活作用。通过扫描电镜(TEM)、X射线光电子衍射仪(XPS)对CdTe/TiO2进行表征。文中, 用紫外可见光吸收光谱(UV-vis)测得尺寸为2-5 nm的CdTe QDs吸收峰为460 nm。研究表明, CdTe/TiO2复合纳米颗粒尺寸在80 nm左右, 其吸收光谱相较于TiO2的光响应区拓展至可见光区。将CdTe/TiO2与HL60细胞进行共同孵育, 采用CCK-8法研究了其在暗室条件下细胞的生长情况和浓度对细胞相对存活率的影响以及在不同浓度的CdTe/TiO2复合纳米颗粒PDT后的细胞活性。实验结果表明: 在共同孵育16 h后CdTe/TiO2对HL60细胞的毒性最强, 10～320 μg/mL浓度的CdTe/TiO2样品对HL60细胞均具有较强的灭活作用。当添加CdTe/TiO2样品浓度为320 μg/mL时, 光照1 h后PDT灭活效率达到87.7%。

目的: 以小鼠为模型, 建立一种基于流式细胞仪为检测手段的快速分离脂肪来源干细胞的方法, 解决间充质干细胞进入实际应用过程中遇到的难题。方法: 取BALB/c小鼠腹股沟内侧的皮下脂肪组织, 采用Ⅰ型胶原酶消化等系列措施, 获取脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)。所得细胞分离培养4代后, 流式细胞仪分选出CD73+CD45- ADSCs后成骨诱导分化。碱性磷酸酶染色和实时荧光定量PCR检测其分化情况。结果: 刚分离培养的ADSCs细胞普遍呈圆形或椭圆形, 传至第三代的细胞, 非MSCs细胞逐渐被淘汰, 剩余的细胞形态逐渐变得一致, 细胞形态呈梭形。流式细胞仪检测发现ADSCs细胞表面抗原标记CD73+CD45- 为20.7%。所得的ADSCs成骨诱导分化后碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色呈阳性, 实时荧光定量PCR检测成骨标志基因发现它们表达上调, 其中ALP的表达高达22倍。结论: 本方法可以获得纯度较高的ADSCs, 且耗时少成本低; 且提示可采用该方法来获得大量的人源ADSCs用于组织工程修复。